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1、 :操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞*小心地分离。2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),生化试剂盒批发,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,生化试剂盒的价格,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
酶的底物及供体的选择:对供体的选择要求是**、*、有明显地显色反应,福建生化试剂盒,而本身无色。有些供体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供体,如TMB和ABTS是较为满意的供体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液**新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
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